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高溫消泡劑與分離提純之鹽析法

分類:行業新聞 發布時間:2012-12-11 瀏覽量:6

微生物酶的提取方法,因酶的結合狀態與穩定性的不同,應用部門對產品的純度要求不同,而有一定的區別。如果提取到的酶是一種可溶于水的復雜混合物,則需要進一步加以純化。適用于大生產的提純方法是以降低成本、提高效能而同時又提高產品純度和質量為前提,事先應當經小試驗規模充分對比,從中加以挑選。理想的提純方法應滿足兩個條件,即比活性的提高與總活性的回收高,但實際上往往難以兼得。鹽析劑中性鹽的選擇:MgSO4,(NH4)2SO4,Na2SO4,NaH2PO4是常用的鹽析用中性鹽。其鹽析蛋白質的能力隨蛋白質的種類而不同,但一般說來這種能力按上述順序依次增大。一般可以說含有多價陰離子的中性鹽與高溫消泡劑其鹽析效果好。但實際上(NH4)2SO4是最多用的鹽析劑,這是因為它的溶解度在較低溫度下也是相當高的。有的酶只有在低溫下穩定,而低溫下Na2SO4,NaH2PO4的溶解度很低,常常不能達到使這種酶鹽析的濃度。鹽析劑用量的決定:不同的酶使之鹽析沉淀的鹽析劑與高溫消泡劑用量是不同的,隨共存的雜質的種類和數量而有所差異。因此,適當的使用量只能根據實驗決定,并根據數據可以繪制出鹽析曲線。pH和溫度的影響:蛋白質的溶解度在無鹽存在下,以在等電點時為最小,在稀鹽狀態時大致也是這樣。但在高濃度的中性鹽溶液與高溫消泡劑中,原有蛋白質溶液pH的影響不大,實際上溶液最終的pH為鹽析劑與高溫消泡劑所決定。在無鹽或稀鹽溶液中,溫度低、蛋白質的溶解度也低,但在高溫消泡劑與高濃度鹽溶液中,溫度高則蛋白質的溶解度反而低。因此,一般說來鹽析時不要降低溫度,除非這種酶不耐熱。分部鹽析法:不同的酶或其它蛋白質在同一中性鹽溶液中溶解度是不同的。劑用這一特性,先后添加不同濃度的中性鹽,就可能把其中的不同酶或雜質蛋白分別鹽析出來。為了保證這種可能性,需要做出目的酶的鹽析曲線,先以低的中性鹽濃度除去大部分的雜蛋白質,此時目的酶則很少沉淀下來。在分離沉淀物之后,在濾液中再補加一定量的同一中性鹽與高溫消泡劑,使達到沉淀目的酶所需鹽析劑與高溫消泡劑的濃度,此時目的酶基本上全部析出。鹽析法的優點是在常溫沉淀過程中不會造成酶的失活,沉淀物在室溫下長時間放置也不會失活,在沉淀酶的同時夾帶沉淀的非蛋白質雜質少,而且適用于任何酶的沉淀。 它的缺點是沉淀物中含有大量的鹽析劑和高溫消泡劑。鹽析沉淀物的收集一般不常用離心分離法,而用傾出法。本文參考《發酵工程原理與技術》一書。

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